Тилозин активен в отношении большинства грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий, в том числе стрептококков, лептоспир, коринебактерий, клостридий, эризипелотриксов, пастерелл, хламидий, трепонем хиодизентерии, спирохет и микоплазм. При внутримышечном введении антибиотик резорбируется быстро и достигает максимальных концентраций в тканях организма примерно через 1 час после введения. Терапевтический уровень антибиотика в тканях сохраняется в течение не менее 20 часов. Тилозин выводится из организма преимущественно с мочой и молоком.